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1．致病作用抗細胞因子抗體的致病性尚未清楚，然而上述自身抗體的Fab片段具有特異性低、高親和力結合相應細胞因子的能力。實際上，在正常人血清中抗IL-la，IL-6的自身抗體是其惟一且重要的結合蛋白。雖然目前對血清中的IgG能夠進行分類檢測，但IFNα、IL10的自身抗體卻無法檢測到。可能的原因是自身抗體與其相應的細胞因子以免疫復合物的形成存在于血清中，或者是血清中存在某種抑制因子。欲將復合物中的抗原、抗體分開，因抗體的高親和力而不易達到目的。至今仍未明白針對這些細胞因子的高親...
[器材和試劑]●多孔板（ImmunoplateMaxisorp，Nuno）●TBS●PEG—純化噬菌體●PBST●封閉液（含5％脫脂牛奶，0．05％Tween—20，0．02％NaN3的PBS）●XLl—Blue細菌提取物●堿性磷酸酶標記的羊抗人IgG（Fc特異性）抗體（Sigma）●底物緩沖液（10％二乙醇胺，0．5mmmol/LMg-2，0．05％NaN3，用HCl調節至pH9．8）●顯色液（在底物緩沖液中加1mg/mlp硝基苯磷酸）●自動酶標儀[方法]1．將100ul含...
[方法]1．用無菌塑料吸嘴挑取一個AmpR噬菌粒菌落（直徑大約lmm）并將其轉入到0．2mlMicroAmp反應管中，內含20u1洗脫緩沖液。在GeneAmp9600PCR儀中，95℃加熱樣本10分鐘（避免用離心澄清，因為加熱可使細胞碎片黏附在管底）。2．將菌落提取物作為該克隆的主拷貝保存。另外，這些菌落也可以直接轉移到PCR反應體系中，并在PCR程序中插入加熱步驟。此時，可將克隆主拷貝穿刺接種到在用UV滅菌并鋪有LB—瓊脂培養基+Amp的微板孔中。3．配置PCR反應體系：將...
CAS號：3844-53-9中文名稱：L-賴氨酸乙酯二鹽酸鹽其他中文名稱：英文名稱：H-Lys-OEt?2HCl其他英文名稱：L-Lysineethylesterdihydrochloride產品規格：特純英文名稱：H-Lys-OEt·2HCl；L-LysineethylesterdihydrochlorideCAS號：3844-53-9C8H18N2O2·2HC1=247.17的別：Purum含量：≥98.0%熔點：145℃比旋光度：+10±1°（c=2%in...
1．通過腹腔注射濃度為1．25％（w/v）的阿佛丁來麻醉小鼠。2．打開胸腔并暴露心臟。3．用10ml的DMEM或PBS來灌注小鼠。4．連同一個或多個對照器官一起，取出要研究的器官和組織，并將其置于一個直徑為30m的細胞培養皿中。5．用無菌刀片將每個器官或組織都切碎。6．將切碎的器官或組織放到2．2m1的無菌塑料管中，并加入1．8m10．5mg/m1的膠原酶。混勻并在37℃搖瓶孵育30分鐘。在37℃培養時，持續搖動樣品。7．以1500r/min的速率短暫離心細胞懸液5分鐘，并棄...
pG6質粒是噬菌體顆粒載體，是為融合蛋白的單價展示設計的。來自輔助噬菌體的野生型pⅥ與噬菌體顆粒載體表達的pⅥ-cDNA的融合蛋白競爭合成原始的噬菌體顆粒。在多鏈接區域除了有一個額外的SalI位點以外，實際上噬菌體顆粒載體pG6A、pG6B、pG6C與載體pDONG6是等同的，pDONG6允許在gⅥ的3’末端進行eDNA文庫克隆。從lac啟動子轉錄可以產生雙側順反子mRNA：*條順反子在lacZ和gⅢ3’末端之間編碼一個融合蛋白，而第二條順反子包含了gⅥ-eDNA融合基因。g...
[方法]A.PCR擴增cDNA插入片段1．在冰浴中將以下成分加到0．2m1微量離心管中（執行10步反應）●水，36．5ul●10×Pfu緩沖液，5．0ul●10mmol/LdNTP，1．5ul●λGTll正向引物（10umol/L），2．5ul●λGTll反向引物（10umol/L），2．5ul●已制備好的Sfi-NotIλGTllcDNA文庫，1．Oul●PfuDNA聚合酶（2．5U/ul），1．0ul2．混合反應物并用50ul的礦物油覆蓋。3．在95℃下使模板變性2分鐘，...
[方法]1．收集新鮮人血液并立即用Ficoll分離白細胞。2．用冰冷PBS洗滌外周血淋巴細胞3次。3．在50ml塑料離心管中收集外周血淋巴細胞，并加入7ml裂解緩沖液（可溶解達到5×108個外周血淋巴細胞），然后劇烈渦旋振蕩以溶解細胞。4．加入7體積（49m1）4m01/L氯化鋰，4℃孵育15～20小時（過夜）。5．將懸液轉移到30mlCorex管內，在吊桶式轉頭內4℃離心2小時，6500r/min。6．棄去上清，并用Kimwipe擦拭試管口。用3mol/L氯化鋰（大約15m...
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